本发明发现了一种钙激活中性蛋白酶-1抑制剂高通量筛选方法，包括以下步骤：(1)钙激活中性蛋白酶-1抑制剂筛选模型的建立与优化：通过实验确定钙激活中性蛋白酶-1最适反应浓度；(2)阳性药验证模型可靠性：配制不同浓度的阳性药，每孔加入5ul；配制2×底物试剂，加样前加入一定量的Cac12，每孔加入10ul；配制一定量最佳浓度的蛋白酶，每孔加入5ul；室温反应20分钟后检测化学发光，得到不同浓度阳性药所对应的抑制率，使用作图软件求算半数抑制率IC50。本方法使用Suc-LLVY-aminoluciferin化学发光Calpain-1底物，在缓冲体系中对Calpain-1和荧光素酶活性进行优化。加入Calpin-Glo试剂后Calpain-1剪切底物，产生辉光型化学发光信号。在这个均相的酶联反应体系中，化学发光信号值与酶的活性成比例变化。该方法简便快捷；化学发光信号强，灵敏度高；分析结果稳定可靠，重现性好。
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来源：北方有色网
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