本发明公开了一种Nanos2启动子核心区域关键转录因子的验证方法：首先，对Nanos2 5’侧翼区序列进行PCR扩增，构建真核表达载体pNanos2‑EGFP，将pNanos2‑EGFP、pEGFP‑N1、pLinker‑EGFP分别转染DF‑1细胞，以对Nanos2启动子区定性分析；分别构建启动子5’端不同长度缺失载体pGL3‑1187、pGL3‑959、pGL3‑788、pGL3‑493、pGL3‑155与pRL‑SV40共转染DF‑1细胞，进行双荧光素酶报告基因检测以对Nanos2启动子核心区域进行鉴定，构建缺失核心区域载体，再次进行双荧光素酶活性分析，观察是否缺失核心区域后启动子活性丧失或显著降低；对Nanos2启动子核心区域进行转录因子结合位点预测，进行双荧光素酶报告分析和CHIP试验确定关键转录因子。通过细胞形态学观察、qRT‑PCR、细胞免疫化学、流式细胞分析等方法检测雄性生殖细胞分化情况。
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来源：北方有色网
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