一种卤醇脱卤酶位点特异性标记多功能探针的方法，属于酶检测技术领域，本发明通过在目标位点引入琥珀突变，然后通过引入与tRNA/RS表达体系完全正交的非天然氨基酸Naek来标记红外探针，再利用叠氮与炔烃的SPAAC反应将化学荧光染料标记在酶蛋白上，实现了蛋白质的位点特异性标记红外探针和荧光探针。本发明的操作流程简单，有效解决了染料标记异质性的问题，克服了传统化学标记的缺陷，本方法所嵌入探针标记的卤醇脱卤酶具有较好的酶活力(7.73U/mg)，保持与野生型卤醇脱卤酶相当的热稳定性和最适反应温度，表现出较高的红外吸收值(0.017a.u.)和荧光发射强度(1469a.u.)，并且荧光嵌入效率可以达到49.03％，且酶蛋白在点击反应过后保留60％以上的活性。本发明方法在蛋白质正交标记中具有广泛的应用前景。
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来源：北方有色网
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