本公开提供了一种在干细胞中进行基因定向敲入的方法，该方法包括如下步骤：S1、将针对待敲入的靶位点的经化学修饰的sgRNA和Cas9蛋白混合以形成RNP复合物；S2、形成待转染AAV病毒颗粒；S3、将干细胞的悬液与所述RNP复合物的悬液混合并进行电转，得到电转后的培养物；S4、向所述电转后的物料中加入待转染的AAV病毒颗粒的悬液以进行的转染，得到转染后的培养物；S5、将所述转染后的培养物极限稀释后进行单克隆化培养，通过PCR及测序并筛选出进行了基因定向敲入的单克隆细胞株。通过上述技术方案，本发明建立了一种无需筛选标记，可显著提高大片段基因敲入干细胞效率的技术方案。
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来源：北方有色网
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