保存条件： 2-8℃冷藏 数量： 666 保质期： 6 适应物种： 多物种 用途范围： 科研实验 产地： 上海 品牌： 科翰盛 规格： 48T 96T 样本： 血清,血浆,尿液,组织等 检测方法： 酶联免疫 应用： 科研 货号： KHSJ18154
检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验 （ELISA） 。往预先包被植物果糖脱氧胆酸（DC）酶联免疫吸附测定试剂盒抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的脱氧胆酸（DC）酶联免疫吸附测定试剂盒 呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度 （OD值） ,计算样品活性。
样品收集、处理及保存方法
1.样本不能含叠氮钠 （NaN3） ,因为叠氮钠 （NaN3） 是辣根化物酶 （HRP） 的剂。
2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行。
3.植物萃取液或其它相关样本:请1000 xg离心20分钟,取上清即可检测。
4. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存
于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1. 酶标仪 （450nm）
2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
操作注意事项
1. 试剂盒保存在 2-8℃ ,使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的 浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封 （低温干燥） 保存。
3. 浓度为 0 的 S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍,最终结果乘以 5 才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
名称
| 96孔配置
| 48孔配置
| 备注
|
微孔酶标板
| 12 孔×8 条
| 12 孔×4 条
| 无
|
标准品
| 0.3mL*6 管
| 0.3mL*6 管
| 无
|
样本稀释液
| 6mL
| 3mL
| 无
|
检测抗体-HRP
| 10mL
| 5mL
| 无
|
20×洗涤缓冲液
| 25mL
| 15mL
| 按说明书进行稀释
|
底物 A
| 6mL
| 3mL
| 无
|
底物 B
| 6mL
| 3mL
| 无
|
终止液
| 6mL
| 3mL
| 无
|
封板膜
| 2张
| 2 张
| 无
|
说明书
| 1份
| 1份
| 无
|
自封袋
| 1个
| 1个
| 无
|
注:标准品（S0-S5） 浓度依次为:0,20,40,80,160,320 U/mL
试剂的准备
20缓冲液加 19 份的蒸馏水。
洗板方法
1. min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板 5 次。
2.自动洗板机:每孔注入洗液 350 μL,浸泡 1min,洗板 5 次。
1. 从室温平衡 20min后的
铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品 50 μL;
3. 样本孔先加待测样本 10 μL,再加 40 μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根化物酶 （HRP） 标记的检测抗体 100 μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置 1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板 5 次 （也可用洗板机洗板） 。
6.每孔加入底物 A、B 各 50 μL,37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入终止液 50 μL,15min内,在 450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
绘制标Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
免责声明
1. 试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。
2.严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。
试剂盒性能
1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数 R值,大于等于
0.9900。
2.灵敏度:检测浓度小于 0.1 U/mL。
3. 特:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.重复性:板内、板间变异系数均小于 15%。
5. 贮藏:2-8℃ ,避光防潮保存。
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